1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
小麦（Triticum aestivum L.）是世界重要的粮食作物，为人类提供了30%的食物来源（science,2014）。
小麦白粉病是由小麦白粉病菌（Blumeria graminis f.sp. tritici, Bgt，禾布氏白粉菌小麦专化型）引起的一种世界性病害，严重影响小麦的品质和产量(李振歧, 1997)。
在小麦白粉病大流行的年份，危害范围十分广泛，严重威胁粮食生产与安全(钱栓等, 2005)。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：在获得的转CRISPR-Cas9 T0代植株中鉴定Stpk-V沉默突变体，并明确其突变类型。
研究内容：利用转基因技术将CRISPR-Cas9载体转入含有Stpk-V的受体小麦品种南农9918中，从T0代植株中鉴定出Stpk-V沉默突变体，探究突变体的表型变化与突变之间的关系。
拟解决的关键问题：鉴定突变体，为进一步探究Pm21、Stpk-V的抗病分子通路创造新材料。
3. 研究的方法与方案
研究方法：1.将构建好的载体（pJIT163-Ubi-Cas9：pU6-gRNA：pAHC20=1:1:1）通过基因枪转化小麦品种南农9918幼胚愈伤：采用PDS1000/He particle bombardment system (Bio-Rad)进行轰击，压力膜为1100 psi。
将膜置于第一层，愈伤置于其下6cm。
轰击前愈伤在高渗培养基上处理4-6h，轰击后继续培养16h，再转移到不含选择压的培养基上暗培养14天左右，至长出旺盛的愈伤，之后转移至筛选培养基（3mg/L Bialaphos）上，两周继代一次，将抗性愈伤转移至分化培养基（3mg/L Bialaphos）上，光照25℃ 10h/day，芽长2cm时转移至生根培养基（3mg/L Bialaphos）中，直至苗长6-8cm、根系健壮，开管炼苗，移苗水培，健壮后移至大田。
4. 研究创新点
本研究第一次将新兴的基因编辑技术CRISPR-Cas9技术应用于小麦中转移的外源染色体片段相关基因功能研究，对于拓宽CRISPR-Cas9技术的应用和进一步探究Pm21、Stpk-V的抗病分子通路具有一定的意义。
5. 研究计划与进展
1.2014年4月-6月：取受体南农9918幼胚，在脱分化培养基上培养成健壮的愈伤，并用基因枪轰击幼胚，获得转基因愈伤。
2.2014年6月-9月：幼胚的分化和筛选，幼苗的分化和筛选，移苗水培，壮苗。
最后将苗移栽至江浦转基因大棚。
