1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、研究背景及意义多年生黑麦草（Lolium perenne L.）是禾本科(Poaceae)黑麦草属(Lolium)的重要草坪草种，是栽培利用面积最大的冷季型草坪草之一。
其叶片光滑柔软、绿期长、再生能力强、成坪速度快，生物量较大，是一种优良的草坪草和牧草。
蛋白质是组成生物体的基本物质，是生命活动的主要承担者。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标筛选到与LpNAL互作的蛋白，构建LpNAL互作蛋白网络图谱五、研究内容1. 构建黑麦草cDNA文库2. 通过酵母双杂交技术筛选与LpNAL互作的候选蛋白3. 将候选全长基因蛋白互作验证六、拟解决的关键问题筛选出与LpNAL互作蛋白并构建LpNAL互作蛋白网络图谱，为进一步探究LpNAL基因在植物体内的调控机理提供新线索。
3. 研究的方法与方案
七、研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1.研究方法（1） 酵母双杂交文库的构建① 以黑麦草Benua Vista为供体材料，采集四周叶龄的衰老叶片为材料，采用Trizol法进行RNA的提取工作，使用Oligotex mRNA Kits（Qiagen）分离纯化样本的mRNA。
② 随着第一链cDNA合成、第二链的合成、加5接头和cDNA长度分离，得到可以使用的cDNA。
③ BP重组反应将cDNA重组到pDONR222载体，通过大肠杆菌进行质粒扩增后得到的质粒再次做LR重组重组到pGADT7-Rec2载体上，通过大肠杆菌扩增后进行保存和文库质粒获取。
4. 研究创新点
八、特色或创新之处本实验以多年生黑麦草为研究对象，LpNAL属于NAC转录因子家族，通过预实验发现该基因和其他植物的同源功能相反，且无人报道。
酵母双杂交系统是研究蛋白质互作的成熟技术，并广泛应用于筛选与已知蛋白互作的蛋白，且方便、有效。
5. 研究计划与进展
九、研究计划及预期进展（1）2016.8查阅并参考相关文献，撰写文献综述，初拟实验方案（2）2016.9-2016.11构建pGBKT-lpNAL-525载体和黑麦草cDNA文库，在酵母菌Y2H共转化（3）2016.12-2017.1利用酵母双杂交系统初筛获得候选互作蛋白（4）2017.1-2017.3将筛选得到的基因片段利用PCR扩增技术得到全长，将其构建到相应的载体，再次验证，得到互作蛋白（5）2017.3-2017.5完成实验数据的整理分析，撰写毕业论文
