1. 研究目的与意义
一、研究内容：
1.大黄虫丸各成分对SMMC-7721生长的影响
2.分析大黄虫丸主要活性成分，以活性成分作配体用磁珠法钓取靶蛋白
2. 文献综述
药物活性成分靶标蛋白的鉴定研究进展
摘 要：活性成分与细胞内靶蛋白的相互作用，是药物发挥作用的基础。目前，对药物活性成分的鉴定主要分为两个途径。一方面是以小分子天然产物来筛选靶标蛋白，称作逆向策略(Reverse strategy)，包括化学蛋白质组学(Chemical proteomics)，化学基因组学(Chemical genetics)和生物物理学(Biophysics)等方法;另一方面可依据天然产物引起的组织或细胞表型变化或与之相关的信号通路和作用网络推测并确定天然产物的靶标，此方法称作正向策略(Forward strategy)，主要包括差异基因组学，蛋白质组学分析，细胞形态分析等方法[1]。
关键词：靶标蛋白；活性基团；小分子探针；LC-MS
3. 设计方案和技术路线
一、实验方案
1.SMMC-7721细胞的培养
2.用大黄虫丸各活性成分处理SMMC-7721细胞，观察生长的影响，筛选合适的给药浓度，确定其主要活性成分。
4. 工作计划
3月1日-3月13日 文献查阅，资料整理，设计课题
3月13日-5月20日 购买药品，细胞培养，开展实验研究
5月20日-6月1日 整理实验材料，分析实验结果，总结论文
5. 难点与创新点
目前，尚未见关于大黄虫丸活性成分靶标蛋白的研究报告，本课题通过大黄虫丸各成分对SMMC-7721细胞的生长抑制实验，筛选出其主要活性成分。以筛选出的活性成分作配基，通过亲和素磁珠钓取靶蛋白。分离得到的靶蛋白再经SDS-PAGE，LC-MS/MS分析，进一步鉴定各个活性成分对应的靶蛋白种类。比较靶标蛋白之间的异同可进一步确定活性成分的活性基团，及药物起抑制SMMC-7721生长功效作用的机制。阐明大黄虫丸发挥药效的方式。
