1. 研究目的与意义
本论文的研究内容主要有以下几个方面:1. 从蜈蚣体内提取分离纯化出蜈蚣蛋白质,并对该蛋白的抗凝活性进行检测。
进行凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)的测定。
2. 以TT法为检测指标,对蜈蚣中抗凝活性蛋白的分离纯化方法进行探索研究:硫酸铵分段沉淀、超滤法、强阴离子交换层析。
2. 文献综述
蜈蚣蛋白质的研究进展摘 要:本文通过文献资料的查阅,对蜈蚣的基源产地、化学成分、蜈蚣蛋白质的提取分离纯化鉴别及蜈蚣蛋白质的抗凝活性四个方面的研究进展进行了归纳总结,以期能够为动物药蜈蚣蛋白质抗凝活性的进一步研究奠定一定的理论基础。
关键词:蜈蚣;基源产地;化学成分;蛋白质;药理活性蜈蚣为节肢动物门(arthropoda)唇足纲(chilopoda)整形目(plastic mesh)蜈蚣科(centipede Branch)动物,最早记载于《神农本草经》[1]中。
具有通络止痛、息风镇痉、攻毒散结等功效。
3. 设计方案和技术路线
1.1蜈蚣蛋白质的提取取蜈蚣药材粉末约10 g,加0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.6)50mL,4 ℃浸渍提取12 h。
1.2血浆制备大耳白家兔,2只,禁食8 h后,戊巴比妥钠麻醉,采用颈动脉插管取血,3.8 %的枸橼酸钠以1:9 的比例抗凝,3000 r/min离心10 min,吸取上清,制备待测血浆。
1.3蜈蚣中蛋白质抗凝活性检测仪器预热0.5 h。
4. 工作计划
1月至2月:查阅关于蛋白质的提取分离纯化以及蜈蚣蛋白活性研究的相关文献2月至3月:确定研究课题,撰写蜈蚣蛋白质抗凝活性的研究进展的综述,制定研究方案,设计具体实验,完成开题报告3月至4月:提取蜈蚣总蛋白并测定其抗凝活性,使用三种纯化方法将蜈蚣蛋白质分段并进行方法优化,分别测不同部分蛋白质的抗凝活性4月至5月:整理实验数据,完成毕业论文写作,提交论文5月至6月:完成论文答辩
5. 难点与创新点
文献研究发现蜈蚣中抗凝活性的物质基础主要是多肽和蛋白质。
但是对于蜈蚣中抗凝活性蛋白质的分部位研究方法还比较薄弱,本课题对蜈蚣中抗凝活性蛋白分离纯化方法进行探索研究,以期为后续蜈蚣中抗凝活性蛋白的进一步研究奠定一定的基础。
