三种不同引物扩增对猪圆环病毒2型检测敏感性的研究开题报告

 2023-02-15 10:25:36

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

疫苗免疫接种是防控动物疾病的有效手段之一。

在近几十年里,得益于传代细胞系和大规模培养技术的使用,动物疫苗生产技术已取得了令人瞩目的成就[1]。

同时,疫苗安全性也一直受到公众和各国兽药管理当局的高度视[2-4]。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:筛选敏感性更强的引物用于猪圆环病毒2型的PCR检测研究内容:1.利用生物信息学软件分析猪圆环病毒ORF2开放阅读框,设计一对引物,并构建合理的PCR方法。

2.选取适宜的猪圆环病毒毒株,并进行毒价测定,以设计不同梯度的病毒用于PCR检测。

3.分别用国标引物、出入境检疫引物和自主研发的引物进行PCV2的PCR检测,并进行对比验证。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:文献检索实验分析技术路线:1. 获取临床毒株和经典毒株;2. 设计引物和PCR程序;3. PCR扩增、凝胶电泳;4. 敏感性分析。

实验方案:1.获取临床分离到的毒株和经典毒株,并测定其毒价;2.根据毒株效价,按一定梯度稀释病毒,提取DNA;3.根据PCV2的ORF2序列,应用Primer Premier5.0软件设计克隆引物;4.分别用三种不同引物和其程序进行PCR扩增,并进行电泳分析;5.对比结果,得出结论。

可行性分析:1.项目实施单位拥有进行试验的条件。

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4. 研究创新点

猪圆环病毒(PCV)的PCR检测方法已应用广泛,但其特异性和敏感性受到引物影响较大,且前期研究发现,应用市售PCR检测试剂盒时,会有假阴性情况发生,故自主设计了一对引物用于PCV抗原的检测,以期寻找更理想的PCR方法用于后续检测。

5. 研究计划与进展

2016年9月,设计引物,建立PCR程序,准备所需材料;2016年10月,测定毒株毒力,PCR扩增,凝胶电泳;2016年11月,比较验证,分析结果,对不理想的实验结果重复实验;2016年12月,撰写论文。

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