1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
禽源致病性大肠杆菌（APEC）主要引起禽类呼吸道感染、心包炎和败血症，也能导致禽类腹膜炎、输卵管炎、肝周炎、气囊炎、心包炎、肉芽肿、蜂窝织炎等，甚至造成禽的突然死亡。随着养禽业的快速发展，大肠杆菌已成为禽类疾病重要的病原菌之一，对家禽业造成了巨大的经济损失。细菌的毒力因子在其致病过程中发挥重要作用。APEC的毒力因子主要包括黏附素、温度敏感血凝素、摄铁系统、侵袭因子、血清抗性蛋白、毒素和大肠杆菌素等。其中 papC、irp2、tsh、vat、astA、iss、cva和cvi等毒力基因是禽源大肠杆菌致病性的关键，此外APEC菌株的致病性也与其质粒携带的基因hlyF 和iss 等有显著的相关性。
有研究显示，部分毒力因子和大肠杆菌耐药表型之间也有显著的相关性。因此，了解禽大肠杆菌毒力因子的分布以及毒力因子和耐药性之间的关系，把握其动态发展有重要的实际意义。为了控制大肠杆菌在养禽业中的传播，为更准确有效地治疗禽大肠杆菌病提供理论依据，本试验对疑似大肠杆菌病死鸡进行病原的分离与鉴定，并对分离的APEC进行毒力基因及抗生素敏感性进行了检测和相关性分析，为禽大肠杆菌病的防控提供了理论参考。禽致病性大肠杆菌（APEC）能够引起肉类和蛋类饲养的大肠杆菌病，这种疾病会产生严重的发病率和死亡率，这意味着世界家禽业的各个方面每年损失数百万美元。最近有许多研究报告提出了关于APEC与人类疾病之间的联系，与人类的肠外致病性大肠杆菌病联系紧密，同时也是其毒力因子的储存宿主，可以引发人类食源性的疾病等，因此，增强对禽大肠杆菌病的控制可以证明对动物和人类健康都是有所帮助的。考和借鉴。
2. 研究的基本内容和问题
对大量的大肠杆菌进行系统的分型，建立大肠杆菌库，通过病原分离培养，细菌分离鉴定，药敏试验，毒力基因检测和耐药基因检测等，将大肠杆菌进行毒力基因及抗生素敏感性进行检测和相关分析后，可以改进对禽大肠杆菌病的预防和控制。
实验中拟解决的关键问题是采集分离得到的禽大肠杆菌菌株应该数量众多，种类繁杂，并且有不同的来源，以便能够支撑后续的实验，确保实验结果具有可信度，能够得到较为理想的结果。
3. 研究的方法与方案
1.材料
麦康凯琼脂培养基，DNA marker，LB培养基，GoTaqgreen Master Mix，琼脂糖均购自青岛海博生物公司。电热恒温箱，37度恒温摇床，离心机，PCR仪，电泳仪，凝胶成像系统和Ulterospec 2000均购自BIO-RAD公司。所有实验引物均由南京擎科生物有限公司合成。
2.病原的分离与培养：
4. 研究创新点
实验前期采集分离了大量的禽致病性大肠杆菌，为后续实验的可行性提供了基础和可行性，也提高了实验的可信度。同时采用多对毒力基因和耐药基因对其进行分型，能够建立更加完整的实验数据。先采用PCR法和MIC法进行了系统进化分群检测和药敏试验，再进行耐药基因和毒力基因的分型，方便在分析数据时观察毒力基因与耐药性之间的关联作用，进一步研究调查在遗传水平上耐药性和毒力之间的相互作用，同时确定其表达机制，以便改进对此类疾病的预防和控制。
5. 研究计划与进展
2018年9月-12月：分离送检的禽病样品，挑去疑似大肠杆菌菌落后送去生物公司送检，送检结果为大肠杆菌的菌株入库编号，冻存在-80度冰箱。
2019年2月：对库存中的所有大肠杆菌菌株进行系统进化分群检测。
2019年3月：对库存中的所有大肠杆菌菌株进行毒力基因检测。
