1. 研究目的与意义
内容：建立符合中医肝肾阴虚客观表征的体外生物效应评价体系，采用D-半乳糖诱导的大鼠肝细胞、大鼠肾细胞衰老模型，验证二至丸补益肝肾体外作用，通过倒置光学显微镜观察细胞形态，MTT法检测细胞活性，β-半乳糖苷酶染色检测衰老，指导后续实验研究。
意义：作为清上补下第一方，二至丸是中医临床肝肾同治的重要代表。
但二至丸如何作用于肝肾两脏、调控肝肾代谢，实现肝肾同治的作用机制尚不十分清楚，严重制约其临床的合理有效应用。
2. 文献综述
D-半乳糖诱导衰老模型的研究进展摘 要如今世界人口老龄化速度不断加快，如何保持老年人身体健康，干预衰老相关的疾病，并能有效地延缓衰老是一项巨大的挑战。
目前，对于衰老的研究有了很大进展，包括D-半乳糖在内的衰老模型也有很多，D-半乳糖引起细胞衰老主要是由于氧化应激,能 引起线粒体、神经损伤。
本文从细胞衰老的角度综述细胞衰老的机制和D-半乳糖诱导细胞衰老模型的研究进展。
3. 设计方案和技术路线
研究方案1. 药物的配制1.1 噻唑蓝（MTT）溶液：精密称取50mg MTT粉末溶于10mL PBS，过滤避光4℃保存（2周内有效）。
1.2 D-半乳糖（D-gal）溶液：精密称取800mg D-gal粉末溶于10mL含10％FBS的DMEM培养基中，依次稀释得40、20、10、5mg/mL D-gal溶液，4℃保存备用。
1.3 二至丸溶液：取30g女贞子（蒸）、30g墨旱莲，分别按照2015版药典打粉，加入8倍95%乙醇浸没2h，回流2h，过滤取滤液浓缩至黏稠，冷冻干燥；精密称取冻干粉末若干，以DMSO助溶溶于10％FBS的DMEM培养基中（DMSO含量0.1%），配成相当于生药40mg/mL的二至丸溶液，再依次稀释得8、1.6、0.32 mg/mL的二至丸溶液4℃保存备用。
4. 工作计划
2.18-2.28查阅并整理文献资料2.28-3.4 完成开题报告3.4-5.31 进行课题实验6.1-6.7完成毕业论文设计
5. 难点与创新点
基于引发衰老的自由基理论，建立D-gal诱导BRL、NRK细胞的衰老模型，研究不同浓度的二至丸对细胞的抗衰老作用。
