1. 研究目的与意义
内容:1.确定最优色谱柱装填上样的流速(以依据sop方法所写装柱方法为参比)2.确定最优上样浓度,buffer(平衡缓冲溶液)浓度3.根据SOP以及经验确定最优装柱方式4.基于AKTA 层析系统对色谱柱进行结果测试5.基于GE(通用电气)公司填料进行装填意义:现今所有装填层析柱方法过于老旧,经常发生使用装填GF(凝胶色谱有时写作分子筛色谱SEC)的方法来装填其他如亲和色谱柱阴阳离子色谱柱疏水色谱柱等。
使得填料分布不均,柱床回弹等现象。
造成柱效低、拖尾因子过高,填料损伤等。
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2. 文献综述
色谱分离柱结果评价的测试方法研究摘要;柱效(从装好的柱床上洗脱出窄而对称的样品峰的能力)同分离柱的峰变宽现象有关,通常也称为理论板数。
峰变宽现象产生的主要原因之一是溶液中分子,如蛋白质多肽和寡核苷酸的纵向扩散。
峰变宽可通过减少扩散距离来减小。
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3. 设计方案和技术路线
1.1依据sop进行装柱1.2改变装柱方法其余不变2.0测柱效选取最优方式(以依据sop方法所写装柱方法为参比)3.0更改Buffer浓度以及相应样品浓度上样4.0测试柱效选取最优解(以最优装柱方法并用150mMNaCl做平衡buffer,1MNaCl做样品,为参比)5.0使用建议流速以及相对于最高流速略低流速上样(以上一步最优解为参比)6.0测试柱效选取最优
4. 工作计划
2022年3月至4月:查阅文献、用户手册、询问老员工、向公司仓库申领相关物料2022年5月上旬:buffer、样品、消毒液配置,耗材准备开始色谱柱填料置换、色谱柱装填、使用AKTA测试柱效、送至冷库。
2022年5月下旬:使用AKTA测试柱效(探究存放时间对层析柱影响)开始色谱柱消毒、拆除、填料保存
5. 难点与创新点
建立色谱柱评价的新流程,已确保测试的准确性和稳定性,防止假阳性导致工作不正常进行。
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