鸡血藤抗类风湿关节炎药效基础研究开题报告

1. 研究目的与意义

1研究目标

阐明鸡血藤组分和治疗类风湿关节炎药效之间关系。

2. 文献综述

鸡血藤抗类风湿关节炎药效活性物质研究

摘要：本文是研究抗类风湿关节炎的中药配方中鸡血藤的药效活性物质综述。鸡血藤为补血活血的传统中药，主要含有黄酮类、酚类、三萜及甾醇类等成分。本文综述了鸡血藤相关的化学成分的药效活性的研究进展，为治疗类风湿关节炎的研究提供药效基础。

关键词：鸡血藤 类风湿 药效活性 成分

鸡血藤是一味沿用千年的活血化淤中药, 古代多篇本草论著中都记载了其去淤血,生新血的功效,并称之为血分之药[1]。

鸡血藤为豆科密花豆属植物密花豆( Spatholobussuberectus Dunn. )的干燥藤茎，其性温，味苦、甘，归肝、肾经，具有活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄等症［2］。

类风湿关节炎( rheumatoid arthritisRA) 是一种以侵蚀性、对称性多关节炎为主要临床表现的慢性、全身性免疫性疾病［3］。

基本病理改变为滑膜炎、血管翳形成，并逐渐出现软骨和骨破坏，最终会导致关节畸形和功能丧失，致使生活质量下降甚至致残。因其病程有着慢性迁延性的特点，日久可使心、肺、肾、动脉、血管等受累。其病因和发病机制目前仍不完全清楚，属于难治性疾病。临证运用中医药治疗本病具有独特优势及悠久历史。

中医治疗类风湿的中药中应用最多的是祛风湿药，其次就是补虚药，活血化瘀药和解表药，本文是研究的鸡血藤是南蛇藤-鸡血藤组分中的一味辅药，本文主要研究鸡血藤的抗炎和免疫的作用。

1.有效成分

鸡血藤中主要含有黄酮类、酚类、三萜及甾醇等类化合物。表1是鸡血藤中分离的各种成分。[4]

表1从鸡血藤中分离得到的各类型化合物

Table 1 Different types of compounds isolated from Spatholobi Caulis

2药效活性物质

我们从以上成分中选取了有关抗类风湿关节炎的药效活性基础物质，以下是简要说明：

2.1异黄酮

2.1.1染料木苷

染料木苷又称金雀异黄酮，黄敬群等人在做小鼠的耳肿胀实验时发现，染料木苷具有一定的抗炎的作用。实验采用对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响，用3个剂量组染料木苷与正常对照组比较差异均具有统计学意义(P。[5]

2.1.2大豆苷元

曾靖等人研究大豆苷元对免疫器官的作用，对小鼠进行不同剂量的灌胃喂养一周，处死后取出胸腺称量，发现大豆苷元能明显增加小鼠的体重和免疫器官的重量。大豆苷元明显提高幼龄小鼠的食欲、增加体重,促进生长发育,增加脾脏、胸腺重量,提高脾指数和胸腺指数,且呈剂量依赖性。其作用机制有待进一步研究。[6]

毛羽等人用碳粒廓清法和血清溶血素法发现大豆苷元具有提高免疫功能低下小鼠的细胞免疫和体液免疫功能。[7]

2黄烷（醇）类

2.2.1儿茶素

郑晓玲等人在做角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验时发现，儿茶凝胶对其有明显抑制作用，作用时间与凝胶剂量呈正性相关。角叉菜胶致炎后1 h，大鼠足趾开始出现急性炎症样红、肿等变化，约 2 h 肿胀达到高峰。儿茶凝低剂量组在 1，2，3 h 时间点对大鼠足趾肿胀有明显的抑制作用(P ＜ 0. 05) ，高剂量组在 1，5，6 h 时间点对大鼠足趾肿胀有明显的抑制作用(P ＜ 0. 01) ，儿茶凝胶高剂量组比低剂量组对大鼠足趾肿胀抑制作用时间更长。[8]

肖红波等人研究发现儿茶素微囊剂可明显对抗环磷酰胺所致的DTH、小鼠HC50水平、碳粒廓清指数K和吞噬指数α的降低,提示儿茶素微囊剂可以提高小鼠的非特异性免疫、特异性细胞及体液免疫功能。[9]

杨宇清等人研究免疫调节作用的体内、外实验结果综合表明，表明儿茶素具有独特的双向免疫调节作用，能依据机体的免疫状态调节免疫反应，使机体免疫系统正常化。表现在对胸腺T淋巴细胞及其产生的细胞因子的调节上，可平衡体内紊乱的细胞因子网络，纠正免疫器官的异常变化，从而改善免疫异常小鼠的细胞免疫功能。儿茶素调节免疫功能是多层次、多环节的一个复杂过程，其作用和机理有待进一步深入研究。[10]

2.2.2紫铆素

紫铆素衍生物对小鼠脾淋巴细胞的免疫功能具有抑制作用，这些衍生物有可能成为潜在的免疫抑制剂。[11]

2.3蒽醌类

杨文修等人研究内毒素(LPS)刺激免疫细胞和巨噬细胞等失控性释放TNFα、ILs和NO等炎性介质,造成多种细胞和组织的强炎性反应而损伤多种脏器的功能。炎性介质的释放与胞内PTK、PKC、CaMPKs等多种激酶的过度活化密切相关。研究证明,大黄素、大黄酸和大黄酚等均可不同程度地抑制上述激酶的活性,并降低LPS诱发的细胞Ca2 升高,从而显著抑制炎性介质的释放。国内外研究报道,大黄酸通过抑制转录因子NF-kB的活化,促进软骨细胞胞外基质成分的合成,从而有抗骨关节炎的作用,是治疗骨性关节炎的有效药物。 [12]

2.3.1大黄素

Hwang 等在第0天和第 21天给予DBA /1小鼠150μgⅡ型胶原蛋白诱导ＲA模型，第25天到35天每隔一天腹腔注射大黄素10 mg / kg，发现大黄素能明显降低小鼠ＲA发病率和严重程度，进一步研究发现大黄素能够抑制 NF-κB信号通路减少金属蛋白酶 MMP-1和MMP-3的表达。在体外大黄素能抑制M-CSF(30 ng /ml)和ＲANKL(50 ng /ml) 诱导的骨髓巨噬细胞向破骨细胞的分化，从而减少其对组织的破坏作用。Zhu等证实大黄素能抑制滑膜组织 PGE2的合成和COX-2的表达，减少TNF-α和IL-6的合成，对RA具有潜在的治疗作用。Ha 等发现大黄素能减少IL-1β和LPS刺激的低氧状态下RA患者滑膜细胞VEGF 和 HIF-1α 的表达，通过抑制组蛋白脱乙酰基酶 1( HDAC1) 而不是 MAPK和NF-kB途径减少MMP-1和 MMP-13的表达，其机制需要进一步研究。

高红刚等人得出结论：大黄素能通过多种途径抑制或减轻炎症反应:1)通过TLＲ-2和PPAＲγ介导的NF-κB途径抑制下游炎性因TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1和MMP-1等的合成; 2)通过P38 MAPK途径抑制TNF-α和IL-6的表达; 3)也有的学者认为是通过抑制组蛋白脱乙酰基酶1而非以上两种途径，可能是因为使用的炎症模型存在差异;4)也能通过抑制NLＲP3减少成熟IL-1β的分泌和抑制SDF-1的表达，最终减少炎性细胞的浸润，减轻炎症反应。因此，大黄素可作为新的抗炎药物应用于各种炎症性疾病的治疗。[13]

2.3.2芦荟大黄素

周晓玲等人实验研究发现芦荟大黄素能够成剂量依赖的方式降低由LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO、TNF-a、IL-1β及抑制iNOS蛋白表达，这可能与芦荟大黄素能抑制由LPS诱导的RAW264.7细胞ERK蛋白磷酸化有关。[15]

2.3.3大黄酸

李晓红等研究发现大黄酸可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,并呈时间和剂量依赖关系,这种作用与其下调iNOS含量及抑制其活性相关。大黄酸下调iNOS含量是通过抑制LPS诱导的CD14表达上调、1Kb-α降解和p65核转位从而抑制iNOS mRNA和蛋白的表达来实现的,而对TLR4/MD-2复合物表达的变化无影响。

大黄酸通过NF-kB通路下调表达但却上调诱导的细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平的事实,提示以上炎症因子可能还存在NF-kB以外的激活途径,而显著降低NO但却增加炎性细胞因子的作用在抗炎或免疫方面的意义还有待进一步研究[16]

高源等人研究发现大黄酸在抑制上清中一氧化氮和白细胞介素生成的同时，还能促进肿瘤坏死因子、白细胞介素1β和高迁移率族蛋白B1的分泌。为了排除细胞特异性可能造成的结果误差，我们又采用了小鼠原代腹腔巨噬细胞重复实验，却得到了相同的结果。[17]

2.4二氢黄酮醇类

2.4.1二氢槲皮素

蔡华君在氢槲皮素的抗炎活性的体内实验中，将小鼠分成六组，每组 12 只，雌雄各半，二氢槲皮素高剂量组（500mg/kg）、二氢槲皮素低剂量组（250mg/kg）、二氢槲皮素介孔胶囊粉末组（250mg/kg）、正常对照组、模型对照组、阳性对照组（复方醋酸地塞米松乳膏又叫皮炎平）。高、低剂量组、阳性组和模型组小鼠,利用二甲苯致小鼠耳肿胀法，观察其抗炎作用，实验结果得出：肿胀抑制率高剂量组 52%，低剂量组72%，介孔粉末组74%，阳性对照组59%，低剂量组和介孔粉末组均优于阳性对照组，说明二氢槲皮素具有显著的抗炎活性。[18]

2.5萜类

2.5.1羽扇豆醇

羽扇豆醇在动物实验中有抗炎症，在一定状态下呈现免疫激活。[19]

2.6甾醇类

2.6.1β-谷甾醇

Gupta等在1980 年通过角叉菜胶介导的水肿与棉球介导的肉芽肿模型证实，β－谷甾醇具有抗炎活性，效果类似于氢化可的松。抗炎作用的主要机制是通过机体的垂体－肾上腺素系统发生的。1993 年，Saeed 等通过大鼠的组织肿胀模型证明β－谷甾醇具有抗炎作用，2006 年，Prieto 等，通过体外模型证实，β－谷甾醇的抗炎机制与非甾体抗炎药的作用机制可能不同，其主要是通过局部免疫调节来发挥抗炎作用。2008 年，Perianayagam等发现β－谷甾醇具有抗炎活性，其部分抗炎机制是通过抑制环氧合酶与脂肪氧合酶通路。2010年，Loizou 等证实，在人血管内皮细胞上，β－谷甾醇抗炎机制为抑制血管内皮细胞黏附分子以及其在细胞内的表达，减弱 NF－κB 的磷酸化，进而抑制动脉硬化，具有心脏保护作用。Ｒohini 等通过多种动物模型证实，β－谷甾醇具有抗炎与抗腹泻活性，其主要机制是抑制了前列腺素的合成。2011年，Michael 等证实 β－谷甾醇通过增强巨噬细胞SHP－1 的活性进而减弱 NF － κB 和 STAT1 通路的活性，发挥抗炎作用。2012 年，Choi等证实β－谷甾醇通过减少 ON的生成，抑制巨噬细胞IL－6活性，减少TNF－α、IL－1β等炎性因子的分泌，产生抗炎作用。2013 年，Liz 等证实，β－谷甾醇促进细胞钙的摄取，抑制髓过氧化物酶、腺苷脱氨酶的活性，抑制 IL －1β 、TNF －α的水平，发挥抗炎作用。[20]

3总结与期望

鸡血藤为补血活血的传统中药，现代药理学证明，鸡血藤具有促进造血功能、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、对酪氨酸酶双向调节、抗炎、抗氧化、镇静催眠等药理作用。但到目前为止，对鸡血藤药效物质基础的研究尚很薄弱，关于鸡血藤的质量控制方法还有一定的局限性。因此，鸡血藤的药效物质基础和质量控制研究亟待进一步深入。RA精确的免疫发病机制仍不为人所知,但已发现与RA发病相关的一些免疫因素和规律,并在此基础上, 开发出了多种治疗RA的免疫制剂。因此无论是鸡血藤还是类风湿关节炎我们仍有广阔的研究市场。

参考文献

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3. 设计方案和技术路线

4. 工作计划

5. 难点与创新点

结合体内外药效进行鸡血藤活性组分的筛选，采用多种色谱技术耦合应用，分析药效与组分/成分的内在联系，揭示鸡血藤整体综合抗RA的科学本质。

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