分子标记技术及其在草坪上的应用研究进展开题报告

 2023-02-19 20:34:35

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

狗牙根(Cynodon dactylon)又名绊根草、百慕大草,属禾本科狗牙根属多年生草本植物,具有繁殖力强、抗旱、耐践踏、质地细腻、色泽好等优良特性,广泛用于高尔夫球场、足球场和城市绿化,是全球暖季型草坪草中坪用价值最高、应用最广泛的草种之一。

近年来随着狗牙根市场应用品种的增多,出现了品种混淆、冒名顶替的现象,影响了品种的使用年限和特定设计功能的发挥,法律纠纷案件时有发生。传统的品种鉴定主要采用形态学方法、田间小区法等,这些方法都不同程度地存在缺陷,不能充分地将坪用狗牙根品种鉴定开来。狗牙根种内在生长特性 (如叶片颜色、质地、生长速度) 和生态环境适应性 (如耐寒性、耐盐性、抗旱性) 等方面表现出丰富的遗传特性。研究狗牙根种质资源有助于深入了解其遗传背景, 为进一步物种发挥功能特性和改良提供物质基础。

目前, DNA分子标记技术因具有准确度高、不受环境和其他因素影响等优势, 已被广泛用于分析植物遗传多样性。常用的DNA标记有SSR、SRAP、RFLP、AFLP、RAPD、ISSR等。分子标记能从DNA水平上检测遗传变异,被认为是进行物种亲缘关系研究的有力工具,微卫星或简单重复序列(SSR)标记被广泛地应用于植物染色体组的研究。SSR (Simple Sequence Repeats) 标记具有数量丰富、多态性高、信息量大、共显性和引物序列公开等优点, 且便于操作、稳定可靠, 在植物遗传多样性分析、指纹图谱构建和目标基因定位等方面已得到广泛应用;与其它标记类型相比,SSR标记还具有很多其他优势:如标记为共显性,以PCR为基础;覆盖整个基因组、数量丰富;在种内群体间,甚至某种程度上在种间或属间均具有较好的可重复性。SSR标记已经成功应用于构建一些较复杂的牧草的遗传连锁图谱,包括红三叶、白三叶、 苜蓿、多年生黑麦草、意大利黑麦草和高羊茅等。吴晓雷等应用SSR标记技术对大豆属(Glycine)的11个种份材料进行了遗传多样性研究,SSR等位基因的主成分分析表明,Glycine亚属和Soja亚属的分类非常明显,利用第一和第二主成分可以明显地将这2个亚属区分开来。谢欢等应用SSR标记技术,对狗牙根18对引物扩增出316条谱带,得到多态性比例为70.13%,分析出了供试狗牙根品种的遗传相似度。

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2. 研究的基本内容和问题

1.1研究的目标

利用SSR分子标记技术对几份供试狗牙根种质材料进行品种鉴定,确定其亲缘关系。

1.2研究的内容

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3. 研究的方法与方案

2.1研究方案

2.1.1试验材料

试验材料为狗牙根(Cynodon dactylon),未知品种分别在南农芳华园艺中心、中山植物园和南京当地野外采集,参照狗牙根种质资源样本拟定品种为T-419(Tifway)、普通狗牙根(Bermudagrass)、南京狗牙根(Nanjing Bermudagrass)、阳江狗牙根(Yangjiang Bermudagrass)、小矮人(Tifdwarf)等,由导师课题组提供。2020年三月下旬,草坪草开始返青后,分别随机采集这几份狗牙根材料的新鲜幼叶2g,每份材料重复3次取样,去离子水冲洗擦干后用自封袋封装,编号保存在-80℃冰箱中备用。

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4. 研究创新点

(1)SSR标记具有数量丰富、多态性高、信息量大、共显性和引物序列公开等优点, 且便于操作、稳定可靠, 在植物遗传多样性分析、指纹图谱构建和目标基因定位等方面已得到广泛应用;本设计应用在草坪草—狗牙根品种鉴定中,为SSR分子标记技术应用在草坪草领域奠定了基础。

(2)初步了解其遗传特性及其背景,进一步验证狗牙根种质资源的分类,初步探索各品种能更好地发挥特定设计功能,为进一步深入研究、保护、开发和利用狗牙根种质资源提供理论依据。

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5. 研究计划与进展

本设计实习的时间为2020年2月—2020年5月

(1)2020.2:查阅文献

查阅相关文献,了解和掌握分子标记技术,尤其是SSR标记,懂得其方法原理及实验步骤;并研究分析分子标记技术在草坪草类的应用进展。

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