1. 研究目的与意义
内容:1.文献查阅及方案设计; 2.提取蝎毒素有效成分;将蝎毒素基因BMKNaTx12装入pTT5真核表达载体中并验证; 3.相关系列动物实验,验证毒素药用效果;大量提取上述蝎毒素基因质粒,将其转染HEK293细胞;4. 数据统计及材料撰写。收取细胞表达上清,ProteinA亲和纯化后验证纯度;5.电生理活性初探。意义:1.掌握查找文献的方法途径及文献的筛选;了解基因工程的基本原理。了解蝎毒素中的几种相对专一性毒素; 掌握分子克隆的一般步骤;观察毒素的作用方式;了解质粒转染细胞的一般步骤;熟练实验室提取相关操作方法;掌握带Fc标签的蛋白纯化的基本流程;掌握数据统计分析的方法。了解膜片钳电生理实验的基本步骤。
2. 文献综述
蜈蚣毒素的研究进展张一宁摘 要:蜈蚣毒素是蜈蚣前颚毒腺分泌的液体,近年来成为研究的热点。
从蜈蚣的种类和分布,蜈蚣毒素的化学成分以及生物活性方面对近年来国内外蜈蚣毒素的研究进展进行综述。
关键词:蜈蚣毒素;活性;研究进展1 引言蜈蚣为节肢动物门唇足纲整形目蜈蚣科动物,其药用始见于2000多年前《神农本草经》,《本草纲目》载之于虫部第四十二卷,主治小儿惊风、疮疡、肿毒、烫伤、风癣等,为传统的动物中药材;现代已被纳入《中华人民共和国药典》。
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3. 设计方案和技术路线
1.重组真核表达载体的构建;2.分泌型毒素多肽的表达和纯化;3.电生理活性检测。
4. 工作计划
2022年1月~2月 查阅相关文献,对研究内容进行初步了解学习,掌握基本实验操作技能。
完成开题报告。
2022年3月~4月 进行东亚钳蝎多肽毒素(BMKNaTx12)的重组制备与表达。
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5. 难点与创新点
1.从转录组学数据出发,利用同源比对和建模预测可能的活性蛋白;2.使用真核表达载体进行分泌型蛋白表达,并以Fc标签作为纯化靶点。
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