1. 研究目的与意义
内容:卡 那 霉 素 (Kanamycin) 是一种氨基糖苷类抗生素,具有很强的抑菌作用,因价格低廉且抗菌性广,而作为兽药被广泛使用。
然而,在动物实际养殖过程中,滥用卡那霉素的现象屡见不鲜,造成其在动物源性食品中存在残留,尤其是在乳品中的残留现象更为严重。
过量的卡那霉素可给人体带来严重的副作用,主要包括肾毒性、造血系统毒性、过敏性等。
2. 文献综述
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3. 设计方案和技术路线
1.准备仪器与试剂2.BSA-KM偶联至S系列CM5芯片以10mM pH4.5的醋酸钠溶液溶解BSA-KM至100μg/ml,以1XHBS溶液为上样缓冲液进行BSA-KM的偶联固定,目标偶联量设置为10000Ru。
3.样品处理(1)将牛奶以1*HBS缓冲液按1:3比例稀释进行稀释;(2)以醋酸将稀释后的牛奶pH 值调至4.6,使酪蛋白沉淀出来;(3)离心(8000r/min)10min,取上清液; (4)将上清液采用0.22μm的微孔滤膜过滤,即得牛奶样品溶液。
4.标准曲线建立采用竞争抑制法,将以1*HBS缓冲液稀释配制好的一系列不同浓度的卡那霉素对照品溶液加入至5μg/ml卡那霉素单克隆抗体溶液 (体积比1:9),使卡那霉素对照品终浓度分别为0ng/ml、0.1 ng/ml、0.2 ng/ml、0.4 ng/ml、0.8 ng/ml、1.6ng/ml、3.2ng/ml、6.4ng/ml、12.8ng/ml、25.6ng/ml、51.2ng/ml、102.4ng/ml,室温孵育1.5小时后上样检测。
4. 工作计划
已完成样品处理,将进行标准曲线建立
5. 难点与创新点
本研究将SPR技术的检测快速、免标记、实时分析、检测通量高等优点与抗体抗原反应的高特异性、高灵敏性结合起来,建立起一种快速测定牛奶中卡那霉素残留的方法。
该方法准确度高、重复性好,定量限低,可用于牛奶中卡那霉素残留的检测。
SPR技术的免标记特点有效规避了卡那霉素缺少发色基团的缺点,无需进行衍生化等处理即可特异性检测卡那霉素,同时简化了样品处理并避免了衍生化等操作对检测结果带来的影响。
