1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病。
CSFV是黄病毒科瘟病毒属的重要成员，为有囊膜的正链RNA病毒。
可引起猪的急性、高度传染性和致死率的传染病，严重危害养殖业的发展[1-2]。
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2. 研究的基本内容和问题
猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种高度接触性传染病。
牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）所致牛、鹿、猪等动物的一种接触性传染病，呈世界性流行。
这两个病毒都严重危害养殖业的发展。
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3. 研究的方法与方案
通过克隆CSFV和BVDV-1的NPro基因，并将NPro基因分别连接到真核表达载体PEGFP-1上，构建重组真核表达质粒PEGFP-NPro，并利用脂质体转染方法瞬时转染细胞，在细胞质内检测出Npro蛋白与绿色巧光蛋白的融合蛋白。将重组蛋白进行Western blot检测，观察结果是否出现目的条带。
Rt-PCR扩增NPro基因→回收纯化目的基因→双酶切→与双酶切的PEGFP-1连接→转化感受态细胞→筛选阳性克隆→重组质粒酶切鉴定→转染细胞→荧光鉴定→Western blot鉴定
4. 研究创新点
对CSFV和BVDV-1的NPro基因进行克隆，将NPro基因分别连接到真核表达载体PEGFP-1上，构建重组真核表达质粒PEGFP-NPro，并利用脂质体转染方法瞬时转染细胞，在细胞质内检测出Npro蛋白与绿色巧光蛋白的融合蛋白。
将重组蛋白进行Western blot检测，观察结果是否出现目的条带，进行了初步的特性研究。
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5. 研究计划与进展
2018.9：克隆CSFV和BVDV的NPro基因，和载体PEGFP-1分别进行双酶切。
2018.10：将NPro基因分别连接到真核表达载体PEGFP-1上，分别构建CSFV和BVDV-1重组真核表达质粒PEGFP-NPro。
2018.11：利用脂质体转染方法瞬时转染细胞，在细胞质内检测出Npro蛋白与绿色巧光蛋白的融合蛋白。
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