小鼠RTP4蛋白抗体的制备及验证开题报告

 2023-02-19 20:34:13

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

本课题通过对小鼠RTP4质粒的构建,RTP4蛋白表达纯化,然后免疫制备RTP4抗体。最终进行体外活性验证。证明RTP4蛋白抗体可以通过生物工程方法进行制备,并可用于分子生物学实验和临床研究。小鼠RTP4抗体的制备和活性研究对小鼠脑组织生物学研究具有重要科学价值。

本课题在国内研究较为稀缺,以研究RTP1及RTP2蛋白及其抗体为主,而在国外的研究中,RTP4蛋白的功能研究比较详细而对于RTP4蛋白抗体研究较少

受体转运蛋白(RTP)是参与G蛋白偶联受体发挥作用的重要的组成成分,RTP具有4种:RTP1、RTP2、RTP3、RTP4,各自之间相互协同作用,促进G蛋白偶联受体的正常工作,但每种之间又具有不尽相同的侧重点,导致每种之间的功能不尽相同,

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标:本课题拟以RTP4为研究对象,首先构建RTP4表达质粒,诱导RTP4原核表达,然后纯化RTP4蛋白并用于兔多克隆抗体的制备,最后采用western bolt和ELISA方法对于制备抗体的反应性和特异性进行验证。本课题研究结果为小鼠RTP4分子生物学研究提供基础和技术。

2.研究内容:通过对小鼠RTP4的智力构建、蛋白表达、抗体制备和抗体活性验证,解决小鼠RTP4抗体制备及应用问题,填补RTP4蛋白在国内研究的空白及其在后续实验使用中的可行性

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3. 研究的方法与方案

1.研究方法及实验方案:

1.1构建小鼠RTP4基因原核表达质粒,原核表达RTP4蛋白及纯化;

1.1.1pET28a-RTP4载体转化至大肠杆菌Arctic Express

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4. 研究创新点

RTP4蛋白抗体能够调节动物机体内细胞内的G蛋白偶联受体,对于整个机体的各个环节进行调节。本课题阐明了其在体外进行实验操作的可行性,为RTP4蛋白抗体在临床应用提供了重要的实验依据。

5. 研究计划与进展

第一阶段(2020.4-2020.5):完成RTP4蛋白抗体的体外验证研究内容

第二阶段(2020.5-2020.6):工作总结及论文撰稿

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