1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
长期添加饲用抗生素所导致的药物残留是产生动物源性食品安全隐患的重要原因之一。
因此，通过调控先天免疫和获得性免疫功能提高仔猪抗病力、减少抗生素使用是保证猪的健康养殖和生产安全猪肉的重要措施。
随着我国全面建设小康社会步伐的不断推进，人们对动物源性食品的需求从追求数量向重视质量安全转变，动物源性食品的质量安全不仅直接关系到人类健康和环境保护，还是促进我国畜牧业可持续发展的必要条件。
2. 研究的基本内容和问题
1研究目标 在成功建立猪巨噬细胞体外培养模型的基础上，研究乳源抗菌肽猪乳铁蛋白肽（LFP-20）对猪巨噬细胞调节先天免疫和获得性免疫功能的影响；以在宿主抵御微生物感染机制中起着重要作用的病原体识别受体之一TLR4为研究靶点，通过基因沉默的方法研究TLR4是否在LFP-20调节猪巨噬细胞功能中发挥作用及其可能途径，探讨LFP-20调控猪巨噬细胞功能的可能机制，为利用营养调控仔猪肠道免疫功能，增强抗病力提供理论依据。
2研究内容 本项目拟通过建立猪巨噬细胞的体外培养模型，研究乳源抗菌肽LFP-20调节猪巨噬细胞功能中的作用；进一步通过沉默TLR4基因，探讨LFP-20调控猪巨噬细胞功能的可能机制。
2.1 猪巨噬细胞体外培养模型的建立；2.2 MTT检测不同浓度乳源抗菌肽LFP-20对巨噬细胞增殖率的影响；2.3建立LPS刺激猪巨噬细胞的模型，检测LFP-20对TLR4及其相关信号通路下游细胞因子（TNF-α，IL-6）表达和分泌的影响；2.4设计并构建猪TLR4的siRNA干扰载体（共设计3个干扰载体和1个空白载体）并进行干扰载体的筛选；2.5研究TLR4在LFP-20调节猪巨噬细胞免疫功能中的作用；3拟解决的关键问题 3.1LFP-20调节猪巨噬细胞免疫功能的作用；3.2LFP-20调节猪巨噬细胞免疫功能的初步机制；
3. 研究的方法与方案
1研究方法、实验方案：1.1 猪巨噬细胞体外培养模型的建立 猪肠道巨噬细胞的分离培养及鉴定。
取5~7 日龄杜长大仔猪回肠段，冷PBS （pH=7.4）冲洗后，剪成10mm 组织块；分离巨噬细胞：移入HBSS/EDTA 缓冲液，37 ℃水浴振荡消化40 min，用含５％胶原酶Ⅳ的钙、镁Hanks 液继续振荡消化2 h；以53 μm 尼龙网过滤细胞悬液得单个细胞悬液，HBSS 洗涤；悬于适当的细胞分离液后，4 ℃，2000 rpm 离心15 min；收集细胞沉淀，重悬于RPMI 1640 培养基；流式细胞仪检测鉴定巨噬细胞。
1.2 猪乳铁蛋白肽（LFP-20）对巨噬细胞免疫调节功能影响的研究 MTT法检测LFP-20对巨噬细胞活力的影响。
4. 研究创新点
1 研究内容方面，通过乳源抗菌肽猪乳铁蛋白肽LFP-20对TLR4信号转导通路的影响，探讨其介导巨噬细胞功能中的作用及初步机制； 2 研究方法方面，利用基因沉默技术研究TLR4信号转导通路在猪乳铁蛋白肽调控巨噬细胞功能中的作用；
5. 研究计划与进展
1研究计划 2014.2：猪巨噬细胞体外培养模型的建立；2014.3.12014.3.7：MTT检测不同浓度乳源抗菌肽LFP-20对巨噬细胞增殖率的影响； 2014.3.82014.3.20：建立LPS刺激的猪巨噬细胞模型，检测LFP-20对TLR4及其相关信号通路下游细胞因子（TNF-α，IL-6）表达和分泌的影响；2014.3.212014.4.21：设计并构建猪TLR4的siRNA干扰载体（共设计3个干扰载体和1个空白载体）并进行干扰载体的筛选；2014.4.222014.5.7研究TLR4在LFP20调节猪巨噬细胞免疫功能中的作用2014.5.82014.5.15整理数据、后期完善、撰写论文；2 预期进展2.1建立siRNA表达载体沉默巨噬细胞TLR4基因的技术； 2.2探讨猪乳铁蛋白肽对巨噬细胞免疫功能的调控作用，揭示其可能分子机制； 2.3发表学术论文1篇 ；
