1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1、本课题意义:
禽流感(Avian Influenza,AI)是由正黏病毒科(Orthomyxoviridae)，A型流感病毒属，A型流感病毒中 任一亚型引起的家禽、鸟和部分哺乳动物发病的一种传染病[1-2]。致病性禽流感引起家禽发病率及死亡率，而低致病性禽流感则导致家禽出现呼吸道症状、长发育受阻及产蛋下降等，严危害养禽业的健康发展[3]。根据A型流感病毒表糖蛋血凝素蛋白(Hemagglutinin，HA)和神经氨基酸酶 (Neuraminidase，NA)的抗原性不不同，可分为不同的亚型，目前已发现有16种HA亚型和910种NA亚型[1-3]。前，高致病性禽流感均为H5N1和H7N7亚型AIV毒株所引发，而禽类中爆发的低致病性禽 流感的亚型主要为H5N2、H7和H9N2亚型。
2004年以来，以H5N1亚型禽流感为代表的高致病性禽流感的暴发引起了了我国政府和相关行政主管 部门的高度视，但在此同时，对低致病性禽流感主要是H9亚型的预防及控制却被忽视了了，养禽场(户) 对H9亚型低致病性禽流感疏于防范，对本病的认知程度和免疫接种理念较差，造成了H9亚型在全国 范围内的普遍流及持续性的危害。目前，H9亚型逐渐成为影响我国养禽业的主要禽流感病毒亚型， 且对禽的危害越来越严，可感染家禽导致产蛋下降、免疫抑制病，与其它病原共感染时导致死亡率， 给我国养禽业造成了了巨大的经济损失。同时H9亚型AIV可以感染人、猪等哺乳动物，在公共卫上具 有要意义[3]。
2. 研究的基本内容和问题
1、目的及内容:
通过对禽流感H9N2亚型的可疑病料料的病毒分离、RNA提取和PCR基因扩增及基因测序，SPF鸡胚回归感染试验、鸡胚接种试验并提取尿囊液进测序对等初步证明其中病料含有的病毒，易感动物回归试验，为提供病料的养禽地提供预防及治疗的意见及建议，并对禽流感H9N2亚型病毒的临床症状诊断和防制提供要依据。
2、拟解决的关键问题:
通过实验室多种法，确定发病鸡所感染的病毒，为禽流感H9N2病毒科学防控策略的制定提供试验依据。
3. 研究的方法与方案
1、研究法及实验方案:
A)病料样品的采集及保存:解剖病死鸡，采集病变组织，病料组织生理盐研磨制成匀浆，离心并收集上清液于—-20°C冻存。B)病毒分离:反复冻融、离取上清、提取总RNA及DNA、反转录及PCR扩增、琼脂凝胶电泳检测、 切胶并回收、基因测序。
4. 研究创新点
本实验特色之处在于筛选疫苗株：根据遗传进化分析，筛选出较好的疫苗株，可以进行抗原性分析及疫苗的研制等工作。
5. 研究计划与进展
2018年9月 ～20178年10月 查阅资料，试验准备，收集病毒进行血清学鉴定；
2018年10月 ～2018年11月 纯化病毒并进行反转录实验；
2018年11月 ～2018年12月 完成全部实验内容，扩增目的片段并测序，获得预期成果；
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