1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.研究意义
猪流行腹泻是目前危害我国养猪业的重要疾病之一,其病原猪流行性腹泻病毒属RNA病毒,极易发生变异,给疫病防控带来困难。病毒的变异直接影响病毒的致病力,本课题拟以一株PEDV为研究对象,通过其感染仔猪,对感染仔猪的临床症状、病理变化等检测以明确该毒株对仔猪的致病能力,日后的深入研究奠定基础。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
以一株PEDV为研究对象,通过其感染仔猪,对感染仔猪的临床症状、病理变化等检测以明确该毒株对仔猪的致病能力。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法及实验方案
1.1细胞毒的制备
将实验室分离的病毒接种到长满单层的Vero细胞上,37°c孵育1.5h后换液。在接种24h后观察细胞病变,细胞病变达90%并成片脱落可收获病毒,测定收获病毒的TCID50。
1.2动物实验
将5只0日龄健康仔猪随机编号,1-3为攻毒组,4-5为空白对照组。攻毒组每只仔猪口服途径给病毒液2ml/只;空白对照组口服给DMEM2ml/只。两组实验动物分别再单独笼舍饲养,饲养条件一致。实验期5d,每天7:00和15:00各观察仔猪临床症状记录。
在攻毒前采集各组仔猪血液、肛拭子;攻毒后每天7:00和15:00采集各组仔猪肛拭子于装有2ml生理盐水的离心管中-20°c保存。
实验期间若有仔猪死亡应解剖,记录组织病变情况,采集死亡猪的十二指肠、空肠、回肠固定并于-20°c冻存。实验期过后统一剖杀剩余仔猪,采集样本同上处理。
1.3检测
对采集的样本组织病理学检测(HE染色),病毒学检测(RT-PCR、免疫组化)。
2.技术路线
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3.可行性分析
本项目校内外指导老师皆从事相关领域研究。项目所在单位研究设备完善,已具备项目所需绝大部分仪器设备。
4. 研究创新点
本实验首次探究该毒株的致病性
5. 研究计划与进展
1.预实验准备:包括试剂的准备,细胞的培养、细胞毒的制备及仔猪的购买
2.动物实验,采集组织粪便样品进行病理学与病毒学检测
3.完成整个课题的研究任务后,进行数据分析整理,撰写论文和提交课题总结报告。
