1. 研究目的与意义
中药商陆为商陆科植物商陆Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陆Phytolacca americama L.的干燥根。商陆味苦、寒，有毒。商陆的毒性在古代很多文献中都有记载，商陆中毒时对消化道系统、心血管系统、神经系统等都有一定的损害。所以在临床使用时商陆必须经过炮制。
目前对商陆毒性研究发现商陆中皂苷类成分是其主要的毒性成分。课题组前期研究发现商陆正丁醇部位，也就是商陆皂苷富集的部分对家兔眼结膜具有强烈的刺激性，腹腔注射后能够显著增加小鼠腹腔PGE2含量。
2010版中国药典中以商陆皂苷甲的含量作为商陆饮片及炮制品的质量标准，但是目前研究认为商陆皂苷甲不是商陆的主要毒性成分。课题组前期研究发现商陆皂苷类成分能够产生炎症刺激性反应，商陆醋炙后炎症刺激性反应减弱。这与商陆皂苷类成分在醋炙之后含量变化相关，寻找商陆中代表性皂苷类成分，研究其醋炙前后含量变化，为商陆醋炙工艺的评价提供重要的依据。
2. 文献综述
有毒中药商陆的研究进展
摘要：商陆，味苦性寒，药性峻猛，属泻下逐水药，具有逐水消肿、通利二便、解毒散结等功效。本文对毒性中药商陆进行系统综述，阐述了商陆的毒性、炮制沿革、化学物质及临床药效等方面，为以后商陆的应用提供依据。
关键词：商陆；毒性；商陆皂苷；炮制
商陆科商陆属植物约35种，分布于热带至温带地区，绝大部分产南美洲，少数产非洲和亚洲，亚洲种均为宿根草本。我国有4种1个变种[1]。中药商陆为商陆科植物商陆Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陆Phytolacca americama L.的干燥根。商陆味苦、寒，有毒，归肺、脾、肾、大肠经。有逐水消肿，通利二便的功能。主治水肿胀满、二便不通。用于水肿尿少，腹水胀满；外治外伤出血、痈肿疮毒等[2]。
1. 毒性
1.1 本草考证[3-4]
商陆属于中医传统的峻下逐水药，始载于《神农本草经》，在秦汉以来的大量医药文献资料中，保存了大量对于商陆毒性的记载。记载简况见表1
表1中药商陆历代毒性记载
朝代 | 文献出处 | 文献记载 |
秦汉 | 《神农本草经》 | 有毒列为下品，主水胀、疝、瘕、痹、熨除痛肿、杀鬼精物。 |
汉末 | 《名医别录》 | 商陆酸，有毒。疗胸中邪气，水肿，痿痹，腹满，疏五脏，散水气。 |
南北朝 | 《本草经集注草木下品》 | 商陆， 味辛、酸，平，有毒。主治胀疝瘕痹，熨除痈肿，杀鬼精物。 |
唐代 | 《药性论》 | 甘，有大毒。能泻十种水病，喉痹不能，薄切醋熬，喉肿处外薄之差。 |
唐代 | 《新修本草》 | 有赤白二种，白者入药用，赤者见鬼神，甚有毒但贴肿外用，若服之伤人乃至痢血不止而死也。 |
唐代 | 《千金翼方》 | 根紫色者、白色者食，赤及黄色者有毒 |
明代 | 《本草蒙签》 | 叶如牛舌舒长，茎高三尺肉脆。秋间花作朵，色赤白两般。花赤者根赤相同，花白者根白无异。白根入药剂，专利水对证可煎；赤根见鬼神，甚有毒贴肿堪用。倘鲁莽误服，必痢血丧身。 |
1.2 中毒表现[5-7]
1.2.1 消化系统损害
早期表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻，严重者可导致呕血、便血。
1.2.2 心血管系统损害
血压增高或下降，心动过速、心律失常。严重时心动过缓，最后可因呼吸衰竭而死亡。
1.2.3 神经系统损害
对神经中枢的刺激样作用，表现为早期有轻度至中度的体温升高，心动较缓，继则眩晕、头痛、言语不清、站立不稳、躁动不安，少数病人表现为突然精神障碍，出现幻觉、胡言乱语、神志恍惚，甚至抽搐、昏迷、瞳孔放大、对光反射消失、膝反射亢进、大小便失禁。大剂量可使中枢神经麻痹、呼吸运动障碍、血压下降、心肌麻痹而死亡。
1.2.4 呼吸系统损害
引起呼吸频率和节律的改变及呼吸道阻塞。
2. 炮制现代研究
2010版药典规定醋商陆为取商陆片（块），照醋炙法炒干，每100kg商陆用醋30kg（醋炙法：取待炮炙品，加醋拌匀，闷透，置炒制容器内，炒至规定的程度时，取出，放凉）[2]。
2.1 醋炙
醋炙工艺在商陆炮制中具有很长历史，醋炙以后商陆皂苷甲的含量上升，利尿功效增加，泻下作用缓和。对胃肠道的刺激性下降，优选的炮制工艺为：加入30%醋拌匀，闷润至醋被吸尽，于120℃炒制30min，取出，放凉[9]。
2.2 醋煮
不同醋量能够影响商陆毒性和药效，经过急性毒性试验和祛痰实验发现醋煮商陆最佳工艺：净商陆片，加30%的醋，置锅内用文武火加热，煮至醋被吸干取出，30%的醋煮降低毒性和祛痰效果最好。
2.3 蒸法
蒸制商陆的记载首见于南北朝的《雷公炮炙论》，清蒸法和加辅料黑豆、绿豆蒸法蒸制时间1h后商陆皂苷的含量开始下降，当蒸制10h后商陆皂苷含量达到稳定[10-12]。商陆蒸制之后毒性下降，功效增强。对商陆醋炙、醋蒸、清蒸、绿豆蒸、高压蒸这几种不同炮制方法生产的饮片中商陆皂苷甲含量进行了考察，发现商陆皂苷甲含量由小到大顺序为：醋蒸商陆＜清蒸商陆2h＜绿豆蒸商陆＜高压蒸商陆＜清蒸商陆1h＜生商陆＜醋炙商陆[13]。
3. 化学成分
1948年从商陆中提取出一种抗病毒的糖蛋白，使得国内外专家对商陆的化学成分研究的越来越多。商陆中主要含有水溶性成分：三萜皂苷、商陆多糖；脂溶性成分：棕榈酸十四脂、油酸乙酯、亚油酸-2-单甘油酯等；蛋白多肽类成分：商陆素、商陆抗病毒蛋白[15]、单多肽链抗真菌蛋白；另外还还有铁、铜、锌、硒等10中人体必需微量元素及微量的组织胺[16]、γ-氨基丁酸等其他成分。其中商陆皂苷、多糖研究较为深入和普遍。
3.1 商陆皂苷
中药商陆和其同属植物美商陆的根中含大量皂苷。王著禄、易杨华、Spengel、Andre strauss等从商陆分离得到20多种皂苷，包括商陆皂苷A,B,C,D,E,F,G,H,I,J,K,L,L1,O,P,Q,M,S,R,N,N1,N2,N3,N4,N5。如表3[18-19]
表3 从商陆中分离得到的皂苷
R1 | R2 | R3 | R4 | |
Es A Es B Es C Es D Es E Es F Es H Es I Es K Es L Es L1 Es N Es O Es P Es Q Es R Es S | OH OH H OH OH OH OH OH H H H OH H OH OH H OH | -xylglc -xyl -xylglc -glc -xyl -xylglc -xylglc -glcglc -glcxylglc -xylglc -xylglc -glcxylglc -xyl -glc -glcxylglc -xylglcrha -xyl | H H H H H H glc glc glc glc glc glc H H H glc glc | Me Me Me Me H H Me Me Me Me Me Me H H H Me Me |
glc:β-D-glucopyranosyl. Rha:α-L-rhamnopyranosyl. Xyl:β-D-xylopyranosyl
3.2 多糖类
商陆多糖是商陆根中主要有效成分之一，从商陆根中分离提取出来商陆多糖Ⅰ（PEPⅠ）、商陆多糖Ⅱ(PEPⅡ)两种酸性杂多糖。两种多糖的主链结构为α-（1-4）连接的多聚半乳糖醛酸[17]。王洪斌[18-19]对商陆皂苷进行了大量的研究，发现PEPⅠ能够显著增强小鼠脾细胞DNA多聚酶α活性及脾淋巴细胞增殖，增强腹腔巨噬细胞、脾细胞和LAK细胞的杀瘤活性。PEPⅡ同样也具有免疫增强活性。
4. 药理作用
4.1 抗炎作用
腹腔注射垂序商陆粗苷15～30 mg/kg，对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用[20]美商陆皂苷E 200 mgkg-1灌胃，能显著抑制大鼠角叉菜胶性足水肿，腹腔注射明显抑制乙酸对小鼠腹腔毛细血管通透性的作用，显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀[21]。商陆皂苷甲对Thyl 系增生性肾炎有一定的治疗作用[22]，在3~1210-6μmol/L能降低LPS作用下中性粒细胞与内皮细胞间高水平的粘率,且能降低LPS诱导下内皮细胞ICAM-1 mRNA和中性粒细胞CD18 mRNA的表达[23]，抑制兔滑膜细胞IL-1和TNF的释放[24]。美商陆抗病毒蛋白(PAP)能显著改善兔IgG加速型肾毒血清肾炎的生化指标，使血清清蛋白增高，血清尿素氮、血清总胆固醇及腹腔吞噬细胞和外周白细胞总数减少，提示PAP是一个潜在的抗肾炎药物。
4.2 对免疫功能的作用
商陆多糖具有增强免疫的作用，商陆多糖Ⅱ( PAP-Ⅱ)能增强免疫及促进造血功能。小剂量可显著促进小鼠脾细胞增殖及Con A，LPS诱导的淋巴细胞细胞增殖[25]。PAP-I也能刺激小鼠细胞增殖，诱导脾细胞产生IL-2，IL-3，此外还能增强混合淋巴细胞反应和NK细胞活性[26-27]。
作为商陆中的主要成分，商陆皂苷能够有效调节免疫功能。EsA降低模型鼠抗dsDNA抗体和淋巴细胞转化水平，显著改善内脏组织炎症。垂序商陆根中所含的有丝 分裂原(PWM)在试管内可诱导人外周血淋巴细胞转化，对T细胞和B细胞均有促有丝分裂作用[28]。
4.3 抗菌、抗病毒作用
商陆具有抑菌性能的物质大都存在于根中，且其不同提取物对不同细菌的抑菌活性情况不一致，抑菌活性最强的物质大都存在于水和正丁醇这种极性较高的溶剂的提取物中，商陆煎剂和酊剂在体外对流感杆菌、肺炎杆菌和奈瑟菌有一定的抑制作用；商陆水浸剂(1∶4)在试管内对许兰氏黄癣菌，奥杜应小芽孢癣菌等皮肤真菌有杀灭作用[29]。
美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)在广谱抗病毒方面有重要的应用价值，对抗植物病毒和动物病毒都具有很强的抗菌活性。其作用机制主要表现为核糖体失活作用，PAP 在体外也有较强的抗 HCV作用，近年来还发现，PAP对脊髓灰质炎病毒、流感病毒、I型单纯疱疹病毒、淋巴细胞性脑络丛脑膜炎病毒等的复制具有抑制作用。
4.4 对消化系统作用
商陆总皂苷对大鼠幽门结扎型、醋酸型和小鼠利血平型溃疡具有一定的防治作用[30]，小鼠灌服美商陆皂苷E 50 mgkg-1，对肠道碳末推进有显著抑制作用；100 mgkg-1对应激性溃疡有明显的抑制作用，但200 mgkg-1则可诱发和加重胃溃疡[31]。
4.5 对呼吸系统的作用
生物碱部分有明显的镇咳作用[32]。采用组胺喷雾引喘法，给豚鼠皮下注射商陆煎剂或酊剂，剂量为5 g.kg-1时未见平喘作用，用量至8 g.kg-1（接近中毒致死量）时，则有一定的平喘作用[33]。
商陆浸剂、酊剂及煎剂对小鼠口服给药，均可祛痰，其中煎剂作用最强。氯仿提取物及皂苷元对平喘亦有显著作用[34]。商陆的氯仿提取物、皂苷元等皆有显著的祛痰作用，皂苷的效果不如酸解后的皂苷元明显[35]，有报道认为主要的成分是商陆皂苷元A和C[36]。
4.6 其他作用
商陆多糖Ⅰ、美洲商陆凝集素（PWM）、商陆皂苷乙在抗肿瘤方面都有一定的效果[37-38]。商陆总皂苷给小鼠灌服可明显提高羟基脲致虚小鼠的3H-TdR渗入率，延长动物耐寒时间，增加体重，减少死亡率，使DNA的合成保持正常水平，表明商陆总皂苷也能影响机体的代谢功能。商陆作为一味峻下逐水的中药，有很好的利尿作用[39]。
5. 讨论与展望
商陆在传统中作为峻下逐水的常用药物，其作用机制一定与胃肠道水液的运转有关。商陆能够导致病人上吐下泻，甚至导致呕血和便血。其毒性与胃肠道水液的过多流失密切相关，研究商陆的毒副作用可以从胃肠道水液转运的机制、水通道蛋白入手，研究商陆皂苷对胃肠道水通道的影响。
商陆作为一种峻下逐水药有着悠久的使用历史，在水肿胀满、二便不通方面有着很好的效果，研究其炮制解毒机制十分重要。解毒机制的全面了解有利于商陆今后的炮制，降低商陆临床使用的安全隐患，推动商陆今后的临床应用。
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3. 设计方案和技术路线
研究方案：1.商陆皂苷类成分的提取分离 2.商陆饮片醋炙前后皂苷类成分的含量测定 技术路线：
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4. 工作计划
2015.02-2022.03 查阅资料，确立方案，购买试验用品，
进行预实验
5. 难点与创新点
（1）目前商陆饮片及炮制品质量标准中主要以商陆皂苷甲含量作为标准，这种方法落后单一，通过测定商陆中代表性皂苷成分的变化，为完善商陆质量的检测、炮制工艺的规范提供有力的依据。
（2）促进中药炮制机理与技术的进一步深入探讨，为以后的针对性、合理性用药提供中药依据。
