1. 研究目的与意义
中药饮片炒荔枝核现行的质量标准是依据1980年的《江苏省中药饮片炮制规范》，规范中只有对其来源、炮制方法、规格等简单描述，《中国药典》中也只有对生品荔枝核的规定，都缺少对炒荔枝核成分含量、质量要求的具体规定，不便于生产企业、检验部门的参考使用。因此现参照《江苏省中药饮片炮制规范修订》，通过各种现代检验手段，为其制定出更详尽的质量标准，更加标准化、规范化。炮制是否规范决定着饮片的质量，决定着中药制剂及配方的质量，并直接关系到广大人民防病治病、康复保健的临床疗效，关系到中医药政策的贯彻和中医药事业的兴衰。规范中药饮片标准管理的重要任务，会为中药饮片科学监管工作提供强有力的技术支撑。
2. 文献综述
荔枝核的质量标准研究概况
吴童1
1.南京中医药大学翰林学院，江苏 泰州 225300
[摘 要]我国作为荔枝的主产国，其种子荔枝核作为一味中药材也很早用于治疗各种疾病，具有行气散结、祛寒止痛之功效，现代科学还研究发现其具有抗肿瘤，抗衰老等多种新的药理作用。本文对近年来荔枝核的质量研究、化学成分进行分析，总结出合理的质量标准及检验方法，确保荔枝核的质量。
[关键词]荔枝核；药理作用；质量标准；本草；
[前 言]荔枝核(Litchi Chinesis Sonn)是无患子科（Sapindaceae）常绿乔木植物荔枝树的干燥成熟种子。其性味甘、微苦，温，归肝、肾经，具行气散结、祛寒止痛之功效，为散寒祛湿佳品，肝经血分之良药，能行血中之气，祛湿散寒通滞，具有很好的药用价值。[1]我国具有得天独厚的地理、气候条件，是荔枝主产区。6～7 月当果实成熟时采摘，用时捣碎，或盐水炒。
1.荔枝核的本草考证
1.1本草记述
自古以来，关于荔枝核的记载甚多. 荔枝核又名荔仁或荔核，《本草纲目》有云：荔枝核入厥阴，行散滞气，其实双结而核肖睾丸，故其治疝卵肿，有述类象形之义。主治心痛、小肠气痛，以一枚煨存性，研末，新酒调服（宗）。治疝气痛，妇人。后来又见《纲目拾遗》曰：其核烧灰酒下，可己痢，止腹痛。回春果，产漳郡康仙祠，叶大如掌，色翠与众荔殊，其实味苦涩酸辣，不可口，采以浸酒。另有《荔枝谱》载以核熳火中烧存性，为末，新酒调一枚末服，治心痛及小肠气。。《玉揪药解》中称荔枝"最益脾肝精血、阳败血寒、最宜此味，血寒宜荔枝"。说明荔枝核能行气散结、祛寒散滞、理气止痛。《景岳全书》中采用荔枝核配伍木香治疗顽固性腹胃脘痛：荔枝核一钱，木香八分。为末。每服一钱，清汤调服。现今《中华本草》记载其植物的主要形态特征为：常绿乔木。偶数羽状复叶，互生；叶片披针形或卵状披针形，先端骤尖或尾状短渐尖，全缘，无毛，薄革质或革质。圆锥花序顶生，阔大，多分枝；花草性，雌雄同株；萼浅杯状，深5裂，被金黄色短绒毛；花瓣5，基部内侧有阔而生厚毛的鳞片；雄蕊6-7，有时8，花丝长约4mm；子房密被小瘤体和硬毛。果卵圆形至近球形，长2-35cm，成熟时通常暗红色至鲜红色。种子全部被肉质假种皮包裹。花期春季，果期夏季。
1.2产地及产品
《本草乘雅半偈》曰：始传于汉世，初出岭南，后生巴蜀，今称闽中者为第一。荔枝如今主产广东、广西、福建、台湾。我国是荔枝的原产地，栽培历史源远流长，大约2000多年。大约到17世纪，荔枝才开始传播到国外，并逐步遍布亚热带20多个国家。现在我国荔枝栽培面积位于世界首位，栽培面积约为60万公顷，产量130万吨，分别占全世界的84.5%和70.5%。我国荔枝的栽培品种有禾荔、黑叶、妃子笑、白蜡、桂味、糯米糍、白糖婴、灵山香荔、三月红、陈紫、元红等。其中栽培面积最大的为黑叶、禾荔。
荔枝商品分荔枝核和盐荔枝核两种。均以粒大，饱满，光亮者为佳。[2]
2.荔枝核的化学成分
2.1挥发性成分
荔枝核中含有较多的挥发类成分，徐多多等[3]采用水蒸气蒸馏法提取荔枝核中的挥发油，并用GC-MS对挥发油化学成分进行分离鉴定，鉴定出荔枝核挥发油的主要化学成分为酯、烯、萘等成分，占挥发油总量的60.54%。测定出的9个挥发性成分分别为2-乙氧基丁烷、雪松醇、十六酸、苯、甲苯、4-甲基-3-戊烯-2-酮、苯甲酸、(E)-4-苯基3-烯-2-酮和(E)-3-苯基-2-丙烯酸。其中相对含量最高的是(E)-3-苯基-2-丙烯酸为46.76%。其次是(E)-4-苯基3-烯-2-酮，占5.36%。而相对含量最少的是2-乙氧基丁烷为0.30%。
2.2氨基酸类成分
荔枝核中含有多种人体必需氨基酸。黄雪松等[4]采用氨基酸自动分析仪共检出荔枝核中含有21种游离氨基酸，主要包括天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、精氨酸和4种未知氨基酸以及6种必需氨基酸，总含量约500μg/kg，其中6种必需氨基酸分别为苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸，占总游离氨基酸量的44%。
2.3皂苷类成分
徐新亚[5]通过实验，首次从荔枝核中得到5个苷类成分。经光谱分析及与文献数据对照，分别鉴定为(-)-松脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、苯乙基β-D-吡喃葡糖苷(2)、乙基β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、乙基α-D-吡喃葡萄糖苷(4)和胞苷(5)。郭洁文[6]等采用DX诱导制作IR大鼠模型,观察荔枝核皂苷对模型鼠各种指标的影响。结果表明荔枝核皂苷可改善DX所致糖、脂代谢障碍,降低模型鼠中血皮质醇及胰岛素水平,改善其胰岛素敏感性。
2.4黄酮类成分
荔枝核黄酮类化合物主要包括黄酮醇类、花素类和黄烷酮类等成分，其中荔枝核中的黄酮以二氢黄酮为主。陈志科等[7]用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定总黄酮含量，获得不同荔枝核样品中总黄酮含量在5.78%～6.80%之间。汤建平等利用微波辅助法提取荔枝核黄酮类化合物并研究其抗氧化作用发现其黄酮类成分具有良好的抗氧化活性, 能有效清除羟基自由基(OH)和超氧阴离子自由基( O2-)。[8]梁荣感等采用细胞培养技术，观察比较荔枝核黄酮类化合物对RSv引起的细胞病变(CPE)的抑制作用发现其水提取物及黄酮类化合物的体外实验表明荔枝核对乙肝病毒HB-sAg,HBeAg,HBV-DNA有明显的抑制作用。[9]
2.5糖类成分
陈志科等[10]用蒽酮-硫酸法测定多糖成分含量时，发现不同荔枝核样品中多糖含量在2.85%～3.34%之间；Chen等[11]采用萃取技术及通过结构分析发现荔枝核中含有阿拉伯糖、果糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖等糖类物质，均属于荔枝核多糖类。袁红[1]等通过小鼠模型实验发现荔枝核多糖提取物能显著降低糖尿病小鼠空腹和餐后1h血糖(P＜0.05)，能显著控制餐1h血清丙氨酸氨基转移酶、总胆固醇、甘油三酯、尿素水平(P＜0.05或P＜0.01)，但对天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐水平影响不明显。
2.6有机酸类成分
刘兴前等[12]通过质谱、红外光谱和氢核磁共振谱从荔枝核中测得一种芳香酸类化合物-原儿茶酸；黄沛仓[13]等又进一步应用LC-10AT液相色谱仪测定出荔枝核有机酸中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸和丁二酸，样品回收率分别为88.5% ~98.8%、95.2% ~106. 8%、96.8% ~ 103.1%、90.6% ~ 105.7%。
2.7脂肪酸类成分
荔枝核中富含的多种不饱和脂肪酸具有很高的营养保健价值，是很好的保健食品辅料。荔枝核脂质中脂肪酸的组成包括软脂酸12%，油酸27%，亚麻酸11%，环丙烯基脂肪酸42%。其中环丙烯基脂肪酸中含有二氢苹婆酸37%，顺-7,8-甲基棕榈酸（45%），顺-5,6-亚甲基肉豆蔻酸（0.4%）和顺-3,4-亚甲基十二烷酸（0.1%）[14]。
3.荔枝核的药理作用
荔枝核的药理作用，从最初具有抗氧化、降血糖、保肝作用，到现如今对其抗肿瘤作用的研究，荔枝核的药理作用越来越广泛。
3.1抗氧化和自由基清除作用
抗氧化剂是维持细胞稳定的氧化还原反应的一种重要物质，能及时清除肌体内过多的自由基，减少对细胞的损伤，在延缓衰老和预防疾病方面有着重要作用。陆志科等[15]实验研究发现荔枝核提取物质量浓度为0.8mg/ml时，对超氧阴离子自由基的清除率达92.96%，超过同质量浓度的芦丁,而其提取物对脂质过氧化的抑制率随浓度的增加而增大。江敏等[16]研究表明荔枝核提取物抗氧化能力大于抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲苯酚(BHT),小于维生素C，其清除OH和DPPH的IC50分别为0.160mg/mL、0.032mg/mL，推断出每克荔枝核提取物总抗氧化能力相当于210mg维生素C的总抗氧化作用。而Wu等[17]研究表明荔枝核提取物的抗氧化能力与酚类成分含量有关。提取物酚类物质中的OH－数目越多，其抗氧化能力则越强，在相应的实验结果中荔枝核提取物、维生素 C、二叔丁基对甲酚的质量浓度均为100μg /m L时的DPPH自由基清除活性分别为73.09%、37.64%和9.65%；在当质量浓度为50μg/ml时，相对应的自由基清除活性分别为28.30%、12.42%和13.25%。以上数据表明荔枝核提取物拥有强大的自由基清除作用，且抗氧化能力与剂量呈正相关。
3.2抗糖尿病作用
李学军[18]采用自创的参芪荔枝降糖汤治疗糖尿病，结果为该药能迅速降糖并改善临床症状，减少了西药用量及其副作用，长期使用防治糖尿病的并发症有作用。郭洁文[19]等观察荔枝核水提取物对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗(IR)的影响，荔枝核能显著降低T2DM伴IR模型大鼠空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验后2h血糖(P，同时改善了病鼠的糖耐量减退。荔枝核3个剂量组还能明显降低病鼠的血清总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)(P，提高高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)含量和HDL-C/ TC比值(P。降低病鼠高胰岛素血症，提高了胰岛素敏感性指数(P。荔枝核对T2DM伴IR大鼠有降血糖及调血脂的作用，并改善其IR。袁红[1]等通过建立糖尿病小鼠模型研究荔枝核多糖提取物小鼠的降糖作用，结果发现其提取物能显著降低糖尿病小鼠空腹和餐后1h血糖(P＜0.05)，能显著控制餐后1h血清丙氨酸氨基转移酶、总胆固醇、甘油三酯、尿素水平(P＜0.05或P＜0.01)。张永明[20]等发现荔枝核皂甙提取物可明显抑制糖异生(抑制率为13.19%)；肝糖元含量明显升高，血清甘油三酯、胆固醇的水平明显降低，认为试药对正常小鼠有调节血糖和血脂的作用。楼忠明[21]等以荔枝核总皂甙提取物、优降糖和黄连素验证它们对糖尿病小鼠的降糖作用，发现其降糖率分别为59.57%、43.64%和43.93%，荔枝核总皂甙提取物组降糖效果明显优于优降糖和黄连素。
3.3抗肝损伤及肝纤维化作用
对于荔枝核具有的抗乙肝病毒作用，已经有不少学者对此进行反复的实验研究。肖柳英等［22］采用多种动物模型进行实验，结果发现荔枝核对模型小鼠血清中升高的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性具有抑制作用，并能提高肝组织血清超氧化物歧化酶(SOD)的活力，使肝细胞免受损伤，从而达到治疗肝损伤目的。徐庆等[23]研究发现应用HepG2.2.15细胞系检测荔枝核提取物A、B、C、D、E、F对HBsAg与HBeAg表达的影响，结果发现，荔枝核提取物对HBsAg与HBeAg表达均有抑制作用，其中E成分作用最强。同时[24]通过其他技术研究荔枝核提取物黄酮类化合物对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达及HBV-DNA含量的影响，认为荔枝核黄酮类化合物体外抗乙肝病毒的作用明确、毒性低、治疗指数高。徐庆等[25]进一步研究荔枝核总黄酮抗鸭乙型肝炎病毒(DrmV)作用，结果表明荔枝核总黄酮有抑制乙肝病毒并具有明显的抗炎、保肝作用。曾文铤等[26]及肖柳英等[27]观察荔枝核治疗乙肝的临床疗效：患者经治疗4周后乏力、纳差、腹胀、肝区不适等均有改善，12周后谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清白蛋白、血清球蛋白、总胆红素也改善明显，24周后明显改善透明质酸、层黏蛋白、人Ⅲ型前胶原、IV型胶原，胆固醇、甘油三酯降低说明荔枝核降酶、退黄、改善肝蛋白代谢和抗肝纤维化疗效较好。之后肖柳英等[28,29]又进行实验证实荔枝核能明显降低免疫性肝炎及急性肝损伤模型小鼠ALT、AST，升高超氧化物歧化酶活性，明显降低丙二醛含量，提出荔枝核对小鼠免疫性肝炎及急性肝损伤具有保护作用。
3.4抑制肿瘤作用
关于荔枝核抗肿瘤作用研究已经延伸到其免疫作用机制。张楠等［30］就研究出荔枝核水提取物对于鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的抑制作用较为明显，且在48h可达到较为理想的抑制效果，在质量浓度为50μg/m L时对细胞增殖的抑制率可达到89.03%，在质量浓度100μg/m L时抑制率可达到98.54%，该结果显示荔枝核提取物具有显著的抑制肿瘤细胞效应。林妮等［31］利用小鼠腋下接种瘤株复制艾氏腹水瘤( EAC)、S180及肝癌荷瘤动物模型，每日1次分别灌胃给予病鼠62、15.5mg/kg荔枝核颗粒，证实其可抑制小鼠S180及EAC 体内外细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用。陈泳辉等［32］同法造模，分别观察荔枝核水提液62.31g/kg及荔枝核颗粒11.8、5.9g/kg对病鼠的影响，结果显示它们均能抑制病鼠EAC、S180，具有抗肝癌效果。陈凤仪等［33］也按前法造模，24h后连续10d分别灌胃给予病鼠62.31g/kg荔枝核，同样证实荔枝核可抑制小鼠肝癌和 S180荷瘤生长，显著增强荷瘤小鼠S180的细胞免疫功能。肖柳英等[34]将移植性S180、肝癌用生理盐水按1:1进行稀释制成含瘤腹水混悬液，每只小鼠腋窝皮下接种0.2mL，24h后灌胃给予荔枝核水提液，连续10d，结果发现荔枝核水提液(62.5g/kg)有明显抗肿瘤活性，对小鼠S180抑瘤率为30.24%~36.28%，对肝癌抑瘤率为29.81%~38.5%。
3.5抗病毒作用
王辉等［35］则利用15.6～125μg/ml荔枝核提取物(LSE)检测细胞毒性和抗科萨奇B3病毒(Cox B3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒(HSV)的活性，指出LSE虽有一定细胞毒性，且不能抑制Cox B3在宿主细胞内的增殖，但对RSV、HSV-1和HSV-2表现出了明显的浓度依赖性的抗病毒作用，其IC50分别为32.3、27.9和20.4μg/ml。李伟等［36］用8LD50的流感病毒(0.05ml/只)滴鼻感染建立感染病毒小鼠模型，感染前1d分别灌胃给予小鼠荔枝核提取液0.3、0.1gkg－1d－1，给药14d后观察到高、低剂量的荔枝核对病鼠流感病毒肺炎均有抑制作用，并能延长感染小鼠的平均存活时间，显示荔枝核可对抗流感病毒。梁荣感[9]等采用细胞培养技术,观察比较荔枝核黄酮类化合物对RSV引起的细胞病变(CPE)的抑制作用，结果发现荔枝核黄酮类化合物半数中毒浓度(TC50)为152.9mg/L，其抗RSV的半数有效浓度(IC50)为58.6mg/L，治疗指数(TI)为体外抗RSV作用与病毒唑相当，且对RSV抑制作用存在明显的量效关系。由此得出荔枝核黄酮类化合物在Hep-2细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用。
3.6其他作用
林妮等［37-38］用荔枝核提取物可调节病鼠激素水平、抑制病鼠乳腺组织雌二醇受体和孕酮受体表达，促进其细胞凋亡，改善乳腺增生及子宫等病变，有效对抗雌激素性乳腺增生病。万强等[39]发现荔枝核皂苷可明显改善病鼠学习记忆功能，作用具有一定的剂量依赖性。
4.荔枝核药材质量评价研究
目前对于荔枝核质量标准研究的相关文献非常少。只有浦香兰[40]等采用薄层色谱法(TLC)对荔枝核配方颗粒中皂苷类成分及原儿茶酸进行定性鉴别，结果表明原儿茶酸的定量测定在0.05574-0.5574微克呈良好的线性关系(r=0.9999)；平均加样回收率100.25％(RSD=2.15％)。薄层色谱法能特异性地鉴别荔枝核配方颗粒中皂苷类成分和原儿茶酸，可作为荔枝核颗粒的质量控制方法。
刘光明[41]等通过对市售9批荔枝核进行鉴定，并按《中国药典》2010年版（一部）要求增加对水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物等指标的分析。建议荔枝核药材中水分检查限度不超过15.0%，总灰分检查限度不超过15.0%，酸不溶灰分检查限度不超过2.0%，水溶性、乙醇浸出物含量分别不低于10.0%和5.0%，可用于评价荔枝核药材的质量。
郭洁文[42]等通过高效液相色谱法测定荔枝核及其制剂中原儿茶酸的含量，使用SpherisorbC18柱，以乙腈-水(15∶85)为流动相，检测波长为260nm。结果表明该方法线性关系良好，平均加样回收率为100 %，RSD为2%(n=5)，精度高，分离度、重复性良好，可用于荔枝核制剂的质量控制。
5.荔枝核的其他应用及展望
荔枝核中的黄酮和酚酸类化合物、蒽醌类化合物和萜类内酯等均有较强的抑菌、杀菌作用，在化妆品中大有用途。科研人员[43]研究了荔枝核提取物的抗氧化、抑菌和抗病毒活性，根据其药理功效，先后对荔枝核在牙齿清洁用品、面膜、沐浴乳等化妆品应用进行了研究。另在保健品方面，利用荔枝核与绿茶的有机结合发明了荔枝茶，既富含荔枝核中蛋白质、纤维、微量元素等营养成分，又有绿茶的提神消疲、生津清热、抗氧化等保健作用，满足人们对营养保健双重功效的追求。还有利用荔枝核提取制成的植物盐具有抑制猪油脂质过氧化的能力，还能降低氯仿致小鼠室颤的发生率。当然还有利用其制作出的女性保健酒具有显著地活血功效，长期适量饮用可缓解、治疗痛经。相关专利可见表1。
序号 | 专利申请号 | 发明名称 |
1 | CN200610111668.9 | 荔枝核提取物在预防龋齿牙齿清洁用品中的应用 |
2 | CN200610153029.9 | 荔枝核提取物在眼霜中的应用 |
3 | CN201610293966.8 | 一种含荔枝核提取物的植物盐及其制备方法 |
4 | CN200610114611.4 | 一种含有荔枝核提取物的面膜及其制备方法 |
5 | CN201610061702.X | 一种含荔枝核皂苷的女性保健酒 |
6 | CN201410732072.5 | 一种荔枝核茶及其制备方法 |
表1 荔枝核应用专利列表
7结论
作为荔枝生产大国，我们有着丰富的药材资源，同时对于中药荔枝核的临床运用的发现也越来越多，在保健品、食品领域也有很多发明。然而对于其炮制品有效成分的提取、加工、检验的标准等还层次不齐，有待进一步的研究制定，如此才能将荔枝核运用在更多领域。
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3. 设计方案和技术路线
试验流程： 1、查阅大量与中药荔枝核相关文献，并初步拟定预实验方案 2、选取样品对对其主要成分定性鉴别，通过对不同的提取方式、薄层板、展开系统等进行一系列对比试验，最终确定提取鉴别方法 3、通过采用不同提取剂，确定最佳含量测定的提取溶剂和色谱条件 4、方法学验证，并整理归纳数据，拟制定新的中药饮片炮制规范 |
4. 工作计划
2022.1-2022.2 查阅荔枝核相关文献、收集药材及对照品
2022.2-2022.3 实验前准备工作
2022.3-2022.5 提交开题报告、实验研究
5. 难点与创新点
荔枝核炮制品的质量标准在2002版炮制规范中有规定，内容不完整且老旧，仅有性状、炮制等基础项。
此次修订的规范能完整规范地描述其性状、规格等，增补显微鉴别、薄层色谱鉴别、检查及含量测定项等内容。
