1. 研究目的与意义
泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale（Sam.）Juzep的干燥块茎，具有利水渗湿，泄热和化浊降脂的功能。
主要活性成分为原萜烷型四环三萜类化合物，其具有抗高血脂、抗癌、降血压、抗HIV1等生理活性，仅存在泽泻属等少数植物类群中,不能满足利用需求。
因此有必要进行生物合成途径的研究，也有利于改善药用植物的品质，其中关键酶基因的克隆、表达和调控是当前的研究热点。
2. 文献综述
泽泻的研究现状和进展戴 锐040012138 南京中医药大学 中药资源与开发专业摘 要：为了更合理开发利用泽泻资源，本文对泽泻的品种考证、化学成分、药理作用、质量评价、质量影响因素、分子生物学基础进行综述并对今后的研究作了展望。
关键词:泽泻；化学成分；质量评价；分子生物研究泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale（Sam.）Juzep的干燥块茎。
冬季茎叶开始枯萎时采挖，洗净，干燥，除去须根和粗皮[1]。
3. 设计方案和技术路线
1. 研究内容(1)关键酶基因表达载体构建将经RACE法克隆的SS关键酶基因的ORF，插入表达载体pCzn1酶切位点间，获得重组质粒pCzn1-SS。
(2)IPTG诱导原核表达将构建质粒转化表达宿主菌E.coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，超声破碎菌体，SDS-PAGE蛋白电泳分析上清液。
(3)重组蛋白纯化用His抗体免疫印迹检测经Ni2 亲和层析得纯化目的蛋白。
4. 工作计划
2022.1.5 2022.1.12查看关键酶SS相关文献资料。
2022.2.222022.2.28整理准备泽泻相关材料。
2022.3.1 2022.3.31学习仪器的结构与相关操作。
5. 难点与创新点
本课题基于前期研究积累及相关理论，根据中药研究特点，以泽泻活性成分为研究对象，采用分子生物学等研究手段，对泽泻原萜烷型三萜类成分生物合成的分子机制进行探讨，开展泽泻鲨烯合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究，为深入探讨SS的催化机制，利用基因工程手段提高泽泻药效成分含量提供可能。
以上相关研究国内外均无报道，具有原创性，且对同类研究具有示范作用。
